新型冠状病毒(SARS-Cov-2)核酸检测试剂盒
New C奥罗navirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Flu矿石scent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【P罗杜克t name 】新型冠状病毒（SARS-Cov-2）核酸检测试剂盒（荧光RT-PCR探针法）
【Packaging spec伊菲cations 】25 次测试/套件
【Intended us年龄】
该试剂盒用于定性检测医疗保健提供者疑似新冠肺炎患者的鼻咽拭子、口咽（咽）拭子、前鼻拭子、中鼻甲拭子、鼻洗液和鼻吸液中的新型冠状病毒核酸。新型冠状病毒ORF1ab和N基因的检测可用于新型冠状病毒感染的辅助诊断和流行病学监测。
【Principles of the p罗切dure 】
该试剂盒专为新型冠状病毒（SARS-Cov-2）ORF1ab和N基因序列设计的特异性TaqMan探针和特异性引物而设计。 PCR反应液含有3套特异性引物和荧光探针，用于特异性检测靶标，另外一套特异性引物和荧光探针作为检测内源看家基因的试剂盒的内标对照。
测试原理是在PCR反应中，特异性荧光探针被Taq酶的核酸外切酶活性消化降解，使报告荧光基团和猝灭荧光基团分离，从而使荧光监测系统能够接收到荧光信号。信号，然后通过PCR扩增的富集作用，使探针的荧光信号达到设定的阈值-Ct值（循环阈值）。在没有目标扩增子的情况下，探针的报告基团接近猝灭基团。此时，发生荧光共振能量转移，报告基团的荧光被猝灭基团猝灭，使得荧光PCR仪无法检测到荧光信号。
为了监测检测过程中试剂的使用情况，试剂盒配备了阳性对照和阴性对照：阳性对照含有靶位点重组质粒，阴性对照为蒸馏水，用于监测环境污染。建议检测时同时设置阳性对照和阴性对照。
【Main com波南ts 】
| Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | 康彭恩特 | |
| 南e | 规格化 | 定量性 | 定量性 | |
| 阳性对照 | 180 μL/瓶 | 1 | 1 | 人工构建的质粒、蒸馏水 |
| 阴性对照 | 180 μL/瓶 | 1 | 1 | 蒸馏水 |
| SARS-Cov-2 混合病毒 | 358.5 μL/瓶 | 1 | / | 特异性引物对、特异性检测荧光探针、dNTPs、MgCl2、KCl、Tris-Hcl、蒸馏水等 |
| 酶混合物 | 16.5 μL/瓶 | 1 | / | Taq酶、逆转录酶、UNG酶等 |
| SARS-Cov-2 混合物（冻干） | 25 次测试/瓶 | / | 1 | 特异性引物对、特异性检测荧光探针、dNTP、Taq酶、逆转录酶、蒸馏水等。 |
| 2x 缓冲器 | 375 μL/瓶 | / | 1 | MgCl2、KCl、Tris-Hcl、蒸馏水等 |
笔记：(1)不同批次试剂盒中的成分不能混合或互换。
（2）自己准备试剂：核酸提取试剂盒。
【Storage cond伊蒂ons 和 expiration date 】
For BST-SARS-25:在-20±5℃条件下长期运输和储存。
For BST-SARS-DR-25:室温运输。 -20±5℃长期保存。
避免反复冻融循环。有效期暂定为12个月。
请参阅标签了解生产日期和使用日期。
首次打开后，试剂可在-20±5℃保存不超过1个月或直至试剂有效期结束（以先到者为准），以避免重复冻融循环，以及试剂冻结的次数-解冻循环次数不应超过6次。
【Applicable instrument】ABI 7500、SLAN-96P、罗氏-LightCycler-480。
【Sample requirements 】
1.适用样品类型：提取的核酸溶液。
2.样品储存和运输：-20±5℃保存6个月。样品冻融次数不超过6次。
【T东部时间ing met霍德】
1.Nucleic acid extraction
选择合适的核酸提取试剂盒提取病毒核酸，并按照相应的试剂盒说明进行操作。推荐使用益新生物科技（广州）有限公司生产的核酸提取纯化试剂盒或同等核酸纯化试剂盒。
2. R埃克tion 雷吉nt prep阿拉tion
2.1 For BST-SARS-25:
(1) 取出SARS-Cov-2 Mix和Enzyme Mix，在室温下完全融化，用Vortex装置充分混匀，然后短暂离心。
(2)将16.5uL Enzyme Mix加入到358.5uL SARS-Cov-2 Mix中，充分混合，得到混合反应液。
(3) 准备干净的0.2 mL PCR八管，每孔标记15uL上述混合反应液。
(4) 加入15 μL纯化核酸溶液、阳性对照和阴性对照，小心盖上八口管帽。
(5) 倒置混匀，快速离心，使液体浓缩于管底。
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
( 1) 将375ul 2x Buffer加入SARS-Cov-2 Mix((冻干)中，制备反应混合物。用移液器吹打充分混匀，然后短暂离心。（反应混合物制备好后，建议-20℃保存）长期保存。）
(2) 准备干净的 0.2 mL PCR 八口管，每孔标记 15 μL 反应混合物。
(3) 加入15μL纯化的核酸溶液、阳性对照和阴性对照，小心盖上八口管帽。
(4) 倒置混匀，快速离心，使液体浓缩于管底。
3. 聚合酶链式反应 amp利菲cation （操作设置请参见仪器说明书。）
3. 1 将PCR 8 管放入荧光PCR 仪的样品室中，按照加样顺序设置待测样品、阳性对照和阴性对照。
3.2 荧光检测通道：
(1)ORF1ab基因选择FAM的检测通道(报告基因:FAM,猝灭剂:无)。
(2)N基因选择VIC的检测通道(Reporter:VIC,Quencher:None)。
(3)内标基因选择CY5的检测通道(Reporter:CY5,Quencher:None)。
(4) 被动参考设置为 ROX。
3.3 PCR程序参数设置：
| 步 | 温度(℃) | 时间 | 循环次数 | |
| 1 | 逆转录反应 | 50 | 15分钟 | 1 |
| 2 | Taq酶激活 | 95 | 2.5分钟 | 1 |
| 3 | Taq酶激活 | 93 | 10秒 | 43 |
| 退火延伸和荧光采集 | 55 | 30秒 | ||
设置完成后，保存文件并运行反应程序。
4.Results analysis
程序结束后自动保存结果，并分析扩增曲线。扩增曲线设置为仪器默认阈值。
【Explanation of test resu其 】
1、判断实验的有效性：阳性对照FAM、VIC通道应有典型的扩增曲线，Ct值一般小于34，但可能因不同仪器阈值设置不同而产生波动。阴性对照 FAM、VIC 通道应为非扩增 Ct。 约定必须同时满足上述要求，否则本次测试无效。
2、结果判断
| FAM/VIC通道 | 判断结果 |
| CT＜37 | 样本检测呈阳性 |
| 37≤CT＜40 | 扩增曲线呈S型，可疑样本需复检；复检结果一致则判定为阳性，否则判定为阴性 |
| Ct≥40或无扩增 | 样本检测呈阴性（或低于试剂盒检测下限） |
注：（1）若FAM通道和VIC通道同时阳性，则判定SARS-Cov-2阳性。
(2) 如果FAM通道或VIC通道为正，而另一个通道为负，则应重复测试。如果同时呈阳性，则判定为SARS-Cov-2阳性，否则判定为SARS-Cov-2阴性。
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